1.目标蛋白的物种千万不要搞错；

2.确认抗体的物种是小鼠、大鼠、兔子等，虽然现在荧光都标记好了，一般不需要二抗，但是最好还是选择你有匹配一抗的二抗，以备不时之需；

3.荧光颜色的选择，一定要是你的流式仪可以读出的，还要跟你需要的counterstain的其他流式抗体错开频率；

4.确定抗体的球蛋白亚型；

5.了解抗体可以测多少样品，可根据推荐的浓度计算下。